一种快速，敏感且廉价的方法，用于检测没有组织萃取的葡萄红色斑点病毒使用环介导的等温扩增
普通英语的研究提供了康奈尔教师，学生和员工的日记文章的简要介绍，非技术摘要。
作者：J.Lucina Romero Romero，Gavriela Dena Carver，Patricio Arce Johnson，Keith L. Perry和Jerrey R. Thompson
病毒学档案，164（5），第1453-1457页。DOI：10.1007 / s00705-019-04207-y。2019年5月。
Tim Martinson摘要。
外带。
- 葡萄红色斑点疾病，由葡萄红色污染病毒（GRBV）引起，是一种新出现的经济疾病，影响葡萄酒葡萄的产量和质量。
- GRBV的当前测试方法涉及从叶片叶片和PCR扩增的DNA提取，需要专门的实验室设备和专业知识。
- 一种新的改进技术，使用“环介导的等温扩增”（灯）是一种简化的测试方法，不需要DNA提取，成本低于每种样品的成本，并且可以在一小时内完成。
- 作者报告说，它达到“比传统PCR方法更敏感的10,000倍”。
- 比色测试需要很少的专业设备或培训，因此可能适合顾问和葡萄园经理用于诊断葡萄园中的红色斑点的程度。
背景。
2008年葡萄红色斑疾病被出现为新公认的葡萄病毒疾病。2012年鉴定了葡萄红色斑点相关病毒（GRBV），从那时起，北美新的种植疫情被广泛检测到。在北美西部，GRBV被昆虫蔓延，三角苜蓿叶蝉。管理涉及检测和去除受感染的葡萄藤。可见的叶片症状（红色斑点）有时在红色品种时出现，而白品种可能表现出间叶氯仑病（黄叶）和边际坏死。视觉症状并不完全可靠，因此需要诊断测试来建立葡萄藤的感染状态。目前使用的主要方法（多重PCR，QPCR）涉及提取DNA，然后进行PCR扩增。
实验。
环介导的等温扩增（灯）是用于在单管中扩增DNA的单管方法。作者设计了一组与编码病毒'外壳蛋白'编码的DNA序列相关的六种不同引物。该底漆组和蒸馏水用于随后的诊断反应，以及通过“PIN刺”方法获得的葡萄组织：
- 无菌移液管尖端用于在其叶柄（3x）中的3叶和叶片（5x）的底部以获得组织残留物。
- 将移液管置于一个小型无菌管中，其中10微升蒸馏水5分钟。
- 将一半微升的水加入到具有12微升灯混合的管中。
- 将管和样品在65℃下温育35分钟。
- 得分红色（负）或黄色（阳性）的溶液颜色得到得分。
结果。
当用总DNA提取的连续稀释液测试并与标准PCR和QPCR测试方法进行比较时，灯测定能够以比这些标准方法的两个级别较低的级浓度检测病毒。由于这种敏感性，作者能够开发和使用“引脚刺”方法，绕过组织中的DNA提取的2小时步骤。进一步的测试，其中收集的时序，温育温度和孵育长度的变化显示，该方法是稳健的;没有观察到假阴性。由于灯测试的极端敏感性，污染和误报是潜在的问题，需要护理处理和执行。
每个样本的成本估计为0.85美元。该程序需要无菌移液管尖端，小离心小瓶，具有适当DNA引物的试剂和水浴。
结论和实践考虑因素。
如果进一步验证进一步广泛的现场试验，则这种简化的检测测试可用于托儿所，认证计划以及感兴趣的种植者，以诊断和检测从场上收集的样品中的红色斑点感染。该灯可能是检测其他病原体的有用技术。
蒂姆马蒂斯顿是在纽约州日内瓦康奈尔阿提特科的园艺部分的一部分高级延期助理。